重组人干扰素制备工艺流程 重组人干扰素生产过程

重组人干扰素制备工艺流程解析

重组人干扰素作为一种重要的生物制药产品，在治疗多种病***感染和免疫系统疾病中发挥着关键作用。小编将详细介绍重组人干扰素的制备工艺流程，包括目的基因的获取、质粒构建、发酵生产、纯化过程等关键步骤。

1.目的基因的获取与质粒构建

目的基因的获取： 在重组人干扰素的制备过程中，首先需要获取目的基因。这通常通过CR技术从基因库中扩增得到。例如，研究人员使用AluⅠ切割原质粒得到7.7k的DNA片段，切割重组质粒得到3.0k、4.8k的DNA片段。

质粒构建： 为了将目的基因导入宿主细胞，需要构建重组质粒。通过AluⅠ切割，可以防止目的基因和质粒反向连接，同时防止目的基因和质粒自身环化。

2.发酵生产

发酵过程： 将重组人干扰素菌种通过干扰素工程菌扩增后，种入二级发酵罐。在设定的温度、H、补料、通气流量、发酵时间等发酵条件下进行发酵。

发酵条件： 发酵过程中，温度、H、补料、通气流量、发酵时间等条件对重组人干扰素的产量和质量至关重要。例如，取1支100μl感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min。加入900μl无抗的L液体培养基，180rm震荡37℃培养45min（30℃培养1-1.5小时），6000rm离心收集菌体。

3.纯化过程

纯化方法： 重组人干扰素的纯化通常采用多种方法，如离子交换、凝胶过滤、亲和层析等。

纯化步骤： 通过离子交换层析去除杂蛋白。然后，使用凝胶过滤层析进一步纯化干扰素。通过亲和层析去除残留的杂质。

4.产品质量检测

质量检测： 在重组人干扰素的制备过程中，对产品质量进行严格检测至关重要。检测项目包括干扰素活性、纯度、无菌性、稳定性等。

重组人干扰素的制备工艺流程复杂，涉及多个步骤。通过对目的基因的获取、质粒构建、发酵生产、纯化过程等关键步骤的严格控制，可以保证产品质量和疗效。随着生物技术的不断发展，重组人干扰素的制备工艺将更加成熟，为更多患者带来福音。